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复溶液用于将标记好的荧光微球重悬，暂时保存或喷涂到结合垫上。复溶液的配方对荧光微球干燥到结合垫上之后的稳定性、释放、上行到膜上的背景都有重要影响。文献说首选PH8.0的硼酸缓冲液，有表活性质，可改善复溶，但实际上Tris缓冲液的应用效果也挺好，应用过程中可以筛选比较下。复溶液中的蛋白必须要添加Casein，相比于BSA，更有利于荧光微球的释放，有助于增强显色、使本地更快变干净，浓度一般为0.3%，有产品验证用0.1%浓度即足够，且有更高的信号值。因为Casein的吸附能力比BSA更强，一方面对微球有更好的封闭作用，另一方面喷涂到结合垫上之后也能对结合垫有更好的封闭，避免微球吸附到结合垫上导致释放困难，上行到膜上也可以对膜有更好的封闭，使背景更干净。表面活性剂有些资料说需要添加，能促进复溶，改善释放，但是更多的资料却不建议添加，原因是担心长时间保存过程中表面活性剂会使微球上结合不牢固的活材脱落，过高的表面活性剂可能会抑制蛋白对结合垫的封闭作用，从而使微球与结合垫有更多的接触和吸附，反而导致影响释放，另外表活会使胶体金或微球标记物喷涂到结合垫上后扩散的更宽。糖必须要加，对于稳定微球标记物和促进微球复溶非常有帮助，一般加5-10%蔗糖。如果要将复溶后的荧光微球喷涂到结合垫上，一般将将离心后的荧光微球标记物用复溶液复溶到浓度为0.25-0.33mg/ml，按照2.7ul/cm的速度喷涂。

旭化成的纤维素彩色微球应用技术资料中，微球复溶到50毫摩尔硼酸缓冲，pH 10.0,10%(w/w)海藻糖，4%(w/w)组氨酸，0.4%(w/w)酪蛋白，复溶后微球的最终浓度0.038%(w/w)，即约0.38mg/ml。提到以下方法可改善假阳性和/或非特异性吸附：

• 优化检测物和/或捕获抗体的数量。

• 在捕获抗体缓冲液中加入蔗糖和/或BSA。

• 优化每个试纸条的标记微球用量。

• 用脱脂牛奶或Casein预处理样本垫。

• 向微球复溶液缓冲液中加入组氨酸或精氨酸等氨基酸。
  

• 使用更快的NC膜(流量<100)，调节NC膜的干燥条件。

• 提高运行缓冲液的离子强度、表面活性剂的浓度，增加运行缓冲液的pH值。

荧光层析法复溶液研究（仅本次实验的结果）

20mM BB pH8.0+5%蔗糖基础上，比较单因素及组合，设计9种复溶液配方：

结果显示：

• 喷涂宽度：表活量大，喷涂线条扩散宽，微量表活扩散少，线条集中；S9扩散比吐温20还严重；加蛋白比不加蛋白线条宽，加BSA扩散程度大于Casein；含0.3%Casein线条最集中。

• 释放和流动封闭情况：2和7/8/9明显好于其它几个，从好到坏排序情况7>2>8>9>5=3>6>4>1。PVPK30降低了释放速度，但是背景相对干净，可用于调整流速。吐温20虽然有助于液体上行，但过多的吐温20可能抑制了蛋白对微球的封闭，使微球有更多的裸露，导致干燥到结合垫上之后微球与结合垫有更强的吸附力，最终显示背景不干净，结合垫上有微球残留。

• 蛋白比较：Casein配方的背景比BSA配方更干净，信号值梯度比BSA更好些。

综上，复溶液选择：20mM BB pH8.0+5%蔗糖+0.5%S9+0.5%PVPK30+0.3%Casein。

根据以上研究结果，设计4个优选配方再比对确认：

结果显示：

• 复溶液含0.5%PVPK30降低释放速度。含0.2%S9有助于释放。

• 最终选择：20mM Tris 7.4+5%蔗糖+0.3%Casein+0.2%S9

• 如需要降低释放速度，提高信号值，可选择：20mM Tris 7.4 + 5%蔗糖+ 0.3%Casein + 0.5%K30+0.2%S9。

以下复溶液配方供参考：

来源：IVD二十载

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