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单宁酸/柠檬酸三钠法（2nm-20nm）

(1)取一250 ml三角瓶，加入79 ml双蒸水和1 ml 1％氯化金，预热至60～70℃。

(2)取一50 ml烧杯，加入4 ml 1％柠檬酸钠，然后根据所制备金粒子体积大小加入不同用量的单宁酸及等量的25 mM K₂CO₃。预热至60～70℃。K₂CO₃的作用是保持溶液的中性pH。因此如果单宁酸的量少于0.5 ml时，对pH的影响不大，K₂CO₃可以省略。改变单宁酸的量可以制备不同粒径的胶体金颗粒。

(3)将上两种溶液迅速混合并充分混匀，加热至沸并保温10分钟。自然冷却。

柠檬酸三钠法（15nm-150nm）

(1)取250 ml三角瓶一个，加100 ml双蒸水及1 ml 1%氯化金，加热沸腾；

(2)取不同量的1%柠檬酸三钠加入上述溶液中。混匀，再保持沸腾10-30 min，溶液颜色首先变黑，再逐渐变红，粒子体积较小时，溶液呈桔红色，而粒子体积较大时，则颜色偏向紫色。

反应物浓度、混合方式、加入顺序、反应温度、液柱压力、反应容器材质这几个物理因素都会影响氯金酸和柠檬酸三钠水溶液的反应，进而影响到最终的胶体金质量。

反应物浓度：生产40nm金颗粒的步骤，将50ml 0.01%（质量/体积）氯金酸加热至沸腾，然后加入0.5ml 1%的柠檬酸三钠溶液，继续沸腾1-3分钟后出现红色。胶体金一旦形成，无论是再延长反应时间还是再添加柠檬酸三钠溶液，金颗粒的粒径都不再发生变化。反应体积按比例增大后，最终生成的金颗粒粒径相应增大约20%，而且此时即使氯金酸或柠檬酸三钠的量有20%差异，也不会对金颗粒粒径造成实质性影响，因为在这一浓度范围内，最初的晶核形成速率几乎是相同的。

反应物的混合：要形成较好晶核，反应物必须充分混匀，这个因素可能是影响胶体金溶液质量的关键物理参数。如果反应器各处的浓度不同，温度不同，则各处反应速率也随之不同，可以通过充分搅拌使各处的浓度和温度一致。小规模生产时可用搅拌子搅拌，但是快速搅拌时会有旋涡发生，液体在很窄的区域转动而不是在整个容器内回流。在500ml的小容器中，即使有旋涡现象，生产的胶体金质量也不会太差，但是在容器体积达到4L时，旋涡影响就会很大，生产的胶体金颗粒会变大且偏心率很大。因此即使小批量生产也不建议用磁力搅拌器搅拌，最好采用机械搅拌器搅拌，要实现均匀一致的混合，取决于反应器直径、搅拌子直径、紊流片厚度、旋转及搅拌速度。

反应物添加顺序：反应物的添加顺序是决定胶体金溶液质量的另一个重要因素，是柠檬酸三钠溶液加到氯金酸溶液中更好，还是反过来更好？如果少量柠檬酸三钠加入到大量氯金酸中，需要很长时间柠檬酸三钠才能分散均匀，期间反应器中将出现浓度明显高低不等的小区域。这种情况将使得反应速率不一，进而导致晶核形成速度不一，因此制得的胶体金质量就差。相反，如果氯金酸快速加入到柠檬酸三钠溶液中，形成浓度不均一的小区域概率就很小。

反应温度：文献中是将柠檬酸三钠加入到沸腾的氯金酸溶液中，然后保持沸腾15分钟，实际上这个反应通常在5分钟内完成。但是沸腾过程会产生气泡，不利于制备均一的胶体金，实际上要生产高质量的金，液相温度控制在95℃左右反应即可平稳进行。为保持温度均匀，可选择水浴或油浴。

反应容器材质：反应容器和搅拌装置的材质对胶体金质量和稳定也有影响。任何污染都会破坏胶体金溶液体系。反应容器推荐使用玻璃材质，搅拌子要采用特氟龙材质，充分洗涤干净。水最好用蒸馏水。

如果觉得自己制备胶体金比较麻烦，批间差不好控制，可以考虑使用商品化的胶体金。例如凌思生物的超高浓度胶体金：产品浓度1%（100 OD），粒径范围20~80nm；高浓度胶体金标记效率高，节省50%以上活材；高浓度作业，减少离心时间，减少大型离心设备投入，缩短供货周期；单分散性能优：PDI低于0.2，减小批间差。或者BBI Solution的商品化胶体金。

来源：IVD二十载

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