1.胶体纳米粒子在结合时的吸收峰转移。
用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金纳米粒子溶液将在520-524 nm处出现吸收峰。与检测抗体分子结合后，吸收峰将转移到528-530 nm。不建议使用吸收峰>531 nm的抗体结合金纳米粒子溶液，因为有可能发生聚集和沉淀。
2.在膜上阻断。
有两种在膜上阻断的选择；要么在样品垫上，要么在结合垫上。
3.检测抗体在金纳米粒子上的共价连接。
抗体和胶体金表面之间的离子吸引和疏水作用使LFIA的检测试剂制备中的连接物。可以使用连接剂如EDAC和NHS或适配器如链霉亲和素和生物素来实现检测抗体与金纳米粒子的共价结合。当然，共价连接将提供更好的连接稳定性，但对检测的灵敏度没有影响。建议对低吸附能力的分子使用共价结合法。共价结合会增加整个检测的成本。
4.LFIA的加速稳定性研究。
为了评估开发的生化或免疫测定试剂的长期稳定性，通常使用阿伦尼乌斯方程。但阿伦尼乌斯方程的计算方法不适用于LFIA测试。在37℃和45℃下30天的加速稳定性不足以声称所开发的检测方法具有2年的稳定性。
进行实时稳定性研究是声称LFIA产品保质期的唯一方法。
5.提高检测方法的灵敏度。
检测方法的灵敏度取决于各种因素。灵敏度可以通过减少孔径大小来提高，从而增加吸水时间。样品垫和结合垫中使用的表面性剂或洗涤剂会影响测定的灵敏度。优化这些表面活性剂的浓度是非常重要的。通过改变无衬垫条中膜之间的空气侧和带状侧的相互作用，有可能提高灵敏度。
6.LFIA推荐使用单克隆抗体还是多克隆抗体？
通常情况下，免疫测定（夹心法）更倾向于单克隆捕获抗体与多克隆检测抗体结合使用。但LFIA更倾向于使用具有远距离表位的单克隆抗体作为捕获抗体和检测抗体。检测试剂中的多克隆抗体会产生大的结构，导致在膜上的不适当的迁移和非特异性的保留。
7.乳胶微珠在LFIA上的应用
彩色的乳胶微粒子可以作为检测试剂用于LFIA中。羧基化的乳胶微粒子可以与蛋白质形成强烈的共价连接，在4℃下稳定多年。
来源：诊断科学
